細胞接收處理流程:
1:觀察有無破損漏液情況,如有請拍照及時聯(lián)系客服。
2:酒精消毒培養(yǎng)瓶表面后顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),觀察拍照后不用打開培養(yǎng)瓶蓋 放入培養(yǎng)箱靜止
2-3小時穩(wěn)定 細胞狀態(tài)。
3:請按照細胞操作指南進行第一次傳代凍存處理。
4:產(chǎn)品隨貨會附帶細胞說明書、細胞培養(yǎng)操作指南、細胞鑒定、支原體檢測報告。
5:若產(chǎn)品有異常或其他疑問,可隨時聯(lián)系客服;轉(zhuǎn)至技術(shù)支持。
常溫細胞收貨當(dāng)天處理方式 1. 收到常溫細胞后,及時拍照記錄有無漏液/瓶身破損現(xiàn)象。 2. 鏡下
觀察有無微生物污染現(xiàn)象,拍照記錄不同倍數(shù)鏡下細胞狀態(tài)和有無染菌現(xiàn)象, 方便后續(xù) 售后處
理。 3. 消毒后,更換贈送的完全培養(yǎng)液放置培養(yǎng)箱靜止2-3小時。如細胞有多數(shù)懸浮細胞需要離心
收集 重新接種止培養(yǎng)瓶。 4. 觀察細胞密度若超過 80%則可正常傳代處理(有的原代細胞不可傳
代,請根據(jù)實際情況決定), 首次傳代推薦比例 1:2 到 1:3(按實際收貨細胞密度決定,若不確
定 可聯(lián)系技術(shù)支持);若細 胞密度不到 80%則可繼續(xù)培養(yǎng),注意擰松瓶蓋或更換透氣瓶蓋;懸浮
細胞注意離心所有培養(yǎng)基以收 集細胞。 5. 由于氣溫,運輸?shù)扔绊懺斐少N壁細胞漂浮的,請將細胞
離心收集后在離心管中消化后進行傳代
(參考附件),或及時聯(lián)系技術(shù)支持進行指導(dǎo)傳代。 貼壁
細胞傳代:1.從培養(yǎng)容器中吸出用過的細胞培養(yǎng)基并丟棄; 2.從與貼壁細胞層相對的容器一側(cè)輕輕
加入沖洗液以避免攪動細胞層,前后搖晃容器數(shù)次 3. 從培養(yǎng)容器中吸出沖洗液并丟棄,向培養(yǎng)瓶
中加入預(yù)熱的胰酶;胰酶量應(yīng)足以覆蓋細胞層 (T25為1ml); 4.將培養(yǎng)容器在室溫下孵育約 2分鐘
(請注意實際孵育時間根據(jù)所用細胞系不同而有所差異); 5.在顯微鏡下觀察細胞解離情況;如果
解離程度未達 90%,可將孵育時間延長幾分鐘,每 30 秒 鐘檢查一次解離情況; 6.細胞解離程度
大于等于 90%時,傾斜培養(yǎng)容器,使細胞上液體盡快流盡;加入所用解離劑兩倍 體積的預(yù)熱完全生
長培養(yǎng)基;吹打細胞層表面數(shù)次,使培養(yǎng)基分散; 7.將細胞轉(zhuǎn)移到15mL 無菌離心管中,以 200×g
的離心力離心 3-5 分鐘
(請注意離心速度和時間依細胞種類不同而有所差異); 8.用最少體積的
預(yù)熱完全生長培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀,將細胞懸液按照推薦比例稀釋,并將適 量體積的細胞懸液
轉(zhuǎn)移到新的細胞培養(yǎng)容器中,把細胞放回培養(yǎng)箱(注:如果使用培養(yǎng)瓶,將其放 入培養(yǎng)箱前應(yīng)將瓶
蓋旋松,以便進行充分的氣體交換,除非您使用的是通氣式培養(yǎng)瓶和透氣性瓶 蓋)。 懸浮細胞傳
代:1.將 T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中 1000rpm 離心 5min,收集上清,加 1- 2ml 完全培
養(yǎng)基重懸,按 1:2 比例進行比例傳代分到新T25瓶中,補充5-8ml/瓶新的完全培養(yǎng)基 , 最后放入
細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)