CCK-8增強性試劑盒
4℃儲存，避光保存兩年
產(chǎn)品概述
CCK8試劑盒（增強型）簡稱 CCK8 試劑盒，是一種基于 WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。
CCK8 工作原理：在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在 450 nm 波長處測定 OD 值，間接反映活細(xì)胞數(shù)量。
CCK8 是 MTT 的一種升級替代產(chǎn)品，和 MTT 或其它 MTT 類似產(chǎn)品如 XTT、MTS 等相比有明顯的優(yōu)點。首先，MTT 被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的 formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；而 CCK8 和 XTT 、MTS 產(chǎn)生的 formazan 都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次，CCK8 產(chǎn)生的 formazan 比 XTT 和 MTS 產(chǎn)生的 formazan 更易溶解。再次，CCK8 比 XTT 和 MTS 更加穩(wěn)定，使實驗結(jié)果更加穩(wěn)定。另外，CCK8 和 MTT、XTT 等相比線性范圍更寬，靈敏度更高。
CCK8 應(yīng)用非常廣泛，如藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等。
使用方法
一、細(xì)胞活性檢測
注意：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加 CCK8 之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。
1. 在 96 孔板中接種細(xì)胞懸液（100 μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃，5% CO2）。
2. 向每孔加入 10 μL CCK8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數(shù)）。
3. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1 - 4 h。
4. 用酶標(biāo)儀測定在 450 nm 處的吸光度。
5. 若暫時不測定 OD 值，可以向每孔中加入 10 μL 0.1M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下，24 h 內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。
二、細(xì)胞增殖-毒性檢測
1. 在 96 孔板中配置 100 μL 的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng) 24 h（37℃，5% CO2）。
2. 向培養(yǎng)板加入 1-10 μL 不同濃度的待測物質(zhì)。
3. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間（例如： 6、12、24 或 48 h）。
4. 向每孔加入 10 μL CCK8 溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數(shù)）。
5. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1 - 4 h。
6. 用酶標(biāo)儀測定在 450 nm 處的吸光度。
7. 若暫時不測定 OD 值，可以向每孔中加入 10 μL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24 h 內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。
