5min快速封閉液(10×)

產(chǎn)品特點：

1. 超快免洗封閉——5min完成封閉，無需洗滌，直接孵育一抗；

2. 無蛋白成分——很好的避免因封閉液成分中的蛋白與抗體非特異性結(jié)合導(dǎo)致的非特異性條帶出現(xiàn)或者高背景；

3. 通用于常規(guī)抗體，磷酸化抗體，生物素標(biāo)記抗體；

抗原抗體結(jié)合增強配方——可有效增加抗原抗體結(jié)合能力，更好的目的條帶信號，更低背景。

1. 將快速封閉液（10×）：去離子水按照1:9稀釋成1×快速封閉液工作液；

2. 將轉(zhuǎn)膜完成后的NC或者PVDF膜放入適宜體積的1×快速封閉液中（注意需完全覆蓋膜，對于 6.5*8.5cm 的整膜，推薦使用量 15-20ml），置于水平搖床上，室溫條件下振蕩孵育 5分鐘。

3. 千萬注意：使用的一抗抗體母液必須用1×快速封閉液稀釋成對應(yīng)的抗體工作液（后續(xù)抗體工作液可直接在4度回收保存至少2個月），可更好的保證后續(xù)實驗結(jié)果的低背景，二抗可正常按照常規(guī)實驗方式稀釋即可。

備注：本步驟也可用HAKATA穩(wěn)定型抗體稀釋（貨號：VK-Y100）來代替快速封閉液稀釋一抗后孵育，曝光效果更佳，還可顯著增加一抗工作液回收次數(shù)與保存時間，稀釋后的抗體工作液4度長期保存時間可延長至6-12個月。

· 取出封閉完成的膜，注意無需TBST洗滌，直接放入步驟2配置的一抗工作液正常孵育，完成后TBST重復(fù)洗滌3次，每次10min。

· 將步驟3中的孵育好一抗的膜加入步驟2配置的二抗工作液中孵育，孵育完成后TBST重復(fù)洗滌3次，每次10min，后續(xù)正常曝光。

保存條件：

4℃保存，保質(zhì)期12個月。

注意事項：

1.該封閉液也可能存在一些不適用的實驗體系，因此對于一些特殊的實驗或抗體效果不能達(dá)到預(yù)期的，可以考慮用更適宜的封閉體系來進(jìn)行實驗；

2.信號弱或者無信號：

（1）目的蛋白樣品上樣量過少或者抗體濃度過低，可加大上樣量或者增加一抗工作抗體濃度；

（2）轉(zhuǎn)膜效率過低導(dǎo)致膜上無目的蛋白或者目的蛋白過少，重新轉(zhuǎn)膜后用麗春紅染色檢驗轉(zhuǎn)膜效果正常后再進(jìn)行后續(xù)封閉與一抗二抗孵育；

（3）抗體效價低，特異性差等原因造成，需要根據(jù)實驗情況進(jìn)行調(diào)整。

3.背景高：

（1）未用快速封閉液稀釋一抗；

解決方案：用快速封閉液稀釋一抗或HAKATA穩(wěn)定型抗體稀釋（貨號：VK-Y100）來稀釋一抗即可。

（2）抗體使用量過多或者蛋白上樣量過大會導(dǎo)致大量的非特異性條帶出現(xiàn)；

解決方案：降低蛋白上樣量或者抗體濃度即可避免。

（3）轉(zhuǎn)印膜的洗滌時間次數(shù)過少或者時間過短；

解決方案：補充TBST洗滌次數(shù)與洗滌膜的時間。

（4）試劑或儀器設(shè)備被污染等原因造成；

解決方案：需要根據(jù)實驗具體情況進(jìn)行調(diào)整。

友情提醒：實驗時請穿戴實驗服并佩戴一次性手套操作。