NP-40裂解液

產品特色：

NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一種比較溫和的細胞組織裂解液。NP-40裂解液裂解得到的蛋白樣品可以 用于常規的PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation，IP)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA等。裂解獲得的蛋白可用BCA蛋白定量試劑盒（HAKATA 貨號：HY-H500）進行蛋白濃度測定。

本品不含有酶抑制劑，使用時，需添加1% PMSF或者蛋白酶抑制劑混合液（100X）（HAKATA  貨號：HDBM-1)用于蛋白酶抑制，若檢測指標涉及磷酸化蛋白，還需添加磷酸酶抑制劑混合液（100X）（HAKATA 貨號：HLSM-1)用于蛋白樣品中磷酸酶抑制。

操作步驟：
1.細胞樣本裂解：

取適量NP-40裂解液，在使用前加入1%PMSF（PMSF的終濃度為1mM）

貼壁細胞：去除培養液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入200微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后，細胞就會被裂解。

懸浮細胞：離心收集細胞，VOTEX震蕩幾秒。按照6孔板每孔細胞加入 200微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀.如果細胞量較多，則分裝成 50-100 萬細胞/管，然后再裂解。

2.組織樣本裂解：

將組織剪成小碎塊，取適量NP-40裂解液，在使用前加入1%PMSF（PMSF的終濃度為1mM）。按照每20mg組織加入200ul裂解液。（若為不易裂解的組織可酌情多添加裂解液）

利用研磨器或者超聲波裂解組織細胞。充分裂解后，按照10000-14000g離心，取上清，進行后續的 PAGE、Western 和免疫沉淀 等操作。

3.細菌或酵母：

對于1ml菌液或酵母液，離心去上清，如果有必要可以使用PBS洗滌一次，充分去除液體后，輕輕vortex或者彈擊管底以把細菌或酵母盡量彈散。加入100-200微升裂解液，輕輕vortex或者彈擊管底以混勻，冰上裂解2-10min。如果希望獲得更好的裂解效果，使用本裂解液進行裂解時，需要單獨加入溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化或者超聲破碎。

保存溫度：

保存：4℃，運輸：4℃或RT，有效期：24個月

注意事項：

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產品僅供科研。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。